Relation temporelle de la charge virale, de la ribavirine, de l’interleukine IL-, IL- et de la progression clinique chez les patients atteints d’un syndrome respiratoire aigu sévère

Bien qu’on pense que la réplication virale et les réponses immunes écrasantes contribuent à la progression du syndrome respiratoire aigu sévère, peu de choses sont connues sur la relation temporelle entre la charge virale, la ribavirine, les cytokines pro-inflammatoires et la progression clinique. La charge de coronavirus du SRAS dans les cas probables étudiés et les niveaux élevés d’interleukine IL- et IL- consécutifs à la charge virale maximale ont été trouvés respectivement dans le lymphocyte nadir pendant la lymphopénie, le pic de lactate déshydrogénase et la densité maximale. d’infiltrats pulmonaires sont plus loin derrière la charge virale maximale d’une médiane de, et jours, respectivement Ces résultats fournissent des informations importantes pour les stratégies thérapeutiques pour traiter le SRAS

Syndrome respiratoire aigu sévère Le SRAS est une maladie infectieuse émergente qui constitue une menace majeure pour la santé des personnes dans le monde L’agent étiologique est un nouveau coronavirus: coronavirus associé au SRAS SARS-CoV Après infection par le SARS-CoV, il y a une période d’incubation de plusieurs jours, suivie d’un large éventail de symptômes et de signes avec les signes caractéristiques de fièvre, de dyspnée, de modifications radiographiques progressives et / ou d’insuffisance respiratoire [,,] Une étude récente a révélé une diminution du SRAS La charge cardiovasculaire précédait la progression de la maladie et suggérait que des réponses immunitaires surexubertives, plutôt qu’une réplication virale incontrôlée, pouvaient contribuer aux dommages progressifs aux poumons Une étude pathologique du SRAS a révélé une hémophagocytose qui rappelle une pneumonie due au virus de la grippe HN, et suggère que les cytokines pro-inflammatoires sont déréglées Cependant, on sait peu de choses sur la mise en relation temporelle De plus, l’effet du traitement par la ribavirine sur la charge virale in vivo reste peu clair. En utilisant la RT-PCR quantitative en temps réel, nous avons mesuré la charge de SRV-CoV dans les échantillons séquentiels de lavage de la gorge obtenus auprès de patients. avec le probable SRAS et examiné sa relation avec la ribavirine, les cytokines pro-inflammatoires, et la progression de la maladie Les échantillons de lavage de gorge ont été choisis parce qu’ils ont un taux de positivité élevé pour le SRAS-CoV chez les patients avec SRAS probable D’un point de vue technique, Les échantillons sont plus faciles à collecter que les spécimens actuellement recommandés, y compris les prélèvements nasopharyngés et les écouvillons oropharyngés. Méthodologie L’étude a inclus des patients adultes, qui ont tous répondu aux définitions de cas cliniques probables du SRAS de l’Organisation mondiale de la Santé salle ventilée à pression négative à l’hôpital universitaire national de Taiwan Taipei entre avril et avril lors de l’épidémie de SRAS à Taipei Tous les cas de SRAS ont été confirmés par des tests de laboratoire Le premier jour de fièvre est défini comme jour de maladie Des radiographies séquentielles et des tests de routine ont été effectués au moins deux fois par semaine. moins d’effets indésirables ont été observés et la méthylprednisolone a été administrée pendant la deuxième semaine chez la plupart des patients ou pendant la première semaine chez les patients dont la maladie évoluait rapidement, comme décrit ailleurs Des immunoglobulines intraveineuses ont été administrées aux patients atteints de leucopénie grave. Progression marquée des lésions pulmonaires Avec le consentement de chaque patient, des échantillons de lavage de la gorge, obtenus par gargarisation de mL de solution saline normale, ont été prélevés tous les deux jours pendant les premières semaines d’hospitalisation et tous les jours ou jusqu’à la sortie. pour les procédures générant des aérosols Tous les échantillons ont été transférés au laboratoire de niveau de biosécurité Après décongélation, on a centrifugé des échantillons de lavage de gorge -mL à g pendant min pour obtenir le surnageant, à partir duquel on a soumis μL à une extraction d’ARN viral Une aliquote d’ARN viral et une quantité connue de les ARN transcrits in vitro ont été quantifiés par un test RT-PCR en temps réel décrit ailleurs La limite inférieure de détection était des copies par ml de lavage de la gorge. Les taux de cytokines pro-inflammatoires-IL-, IL-, et TNF-α-étaient mesuré par des kits ELISA commerciaux EndogenResults Les informations démographiques et les résultats de laboratoire pour les patients atteints du SRAS sont résumés dans le tableau Parmi les tests de laboratoire qui ont été rapportés avoir des résultats anormaux dans les cas de SRAS, de lymphopénie et de taux élevé de lactate déshydrogénase LDH. La numération des lymphocytes nadir chez les patients atteints de lymphopénie est survenue à une médiane de jour, jour de la maladie, et le pic de LDH est survenu à une médiane de la gamme de jour, jour de la maladie. Les radiographies thoraciques pour chaque patient ont également été évaluées par des radiologistes afin de déterminer la radiographie avec un maximum d’infiltrats pulmonaires, qui se sont produits à une médiane de la gamme de jour, jour de la maladie.

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques démographiques, de laboratoire et radiographiques des sujets atteints de syndrome respiratoire aigu sévère SARSTable View largeTélécharger les diapositivesDémographiques, de laboratoire et radiographiques des sujets de l’étude avec syndrome respiratoire aigu sévère Les charges SARSVIR dans les échantillons séquentiels de lavage de la gorge Les charges virales maximales variaient de × à × copies / mL, ce qui se situait dans la fourchette indiquée ailleurs Il n’y avait pas de corrélation entre la charge virale maximale et la numération lymphocytaire nadir ou le pic LDH r = et P = et, respectivement, par régression linéaire simple La charge virale maximale est survenue à un intervalle de jour moyen, jour de la maladie, qui était antérieur au jour, ce qui a été rapporté ailleurs D’intérêt, le calendrier des paramètres de progression clinique – numération lymphocytaire nadir , le pic de LDH et le maximum d’infiltrats pulmonaires – retardés par rapport à la charge virale maximale d’une médiane de jours, jours, Ces résultats indiquent que le SRAS progresse après la diminution des charges virales. Pour évaluer l’effet du traitement par la ribavirine in vivo, nous avons examiné le profil de charge virale et sa relation avec l’utilisation de la ribavirine. Un profil de charge virale en forme de V avec principalement un seul pic a été observé chez les patients A-F, un modèle avec des pics a été trouvé chez les autres patients G et H Cette constatation suggère que les profils de charge virale varient selon les patients. certains patients ont un profil plus long et plus complexe. En comparant ces résultats avec l’utilisation de la ribavirine, une diminution de la charge virale a été observée chez les patients A, B, C et F. Cependant, la charge virale est restée élevée malgré & gt; jours chez les patients D, E et H Chez les patients G, la charge virale diminuait avant l’administration de ribavirine, puis augmentait et diminuait après la réception de la ribavirine. Cette découverte suggère que la ribavirine n’était pas efficace pour réduire la charge virale chez les patients. des patients étudiés

Figure Vue largeDownload cours de la charge virale, utilisation de la ribavirine, cytokine pro-inflammatoire IL- et IL- et progression pulmonaire chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu sévère SRAS A-H, Données pour les patients avec SRAS probable Voir Méthodes pour une description des dosages Utilisé dans ces analyses Triangle fermé, intubation; lignes pointillées, limite inférieure de la détection de la charge virale ARN copies / mL; barres hachurées, utilisation de la ribavirine; barres ouvertes, utilisation de stéroïdes; triangles ouverts et quadrilatères, périodes au cours desquelles les infiltrats pulmonaires maximaux ont été détectés par radiographie thoracique; Barres pointillées, utilisation intraveineuse d’immunoglobulinesFigure View largeTélécharger Diagramme de la charge virale, utilisation de la ribavirine, cytokine proinflammatoire IL- et IL- et progression pulmonaire chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu sévère SRAS A-H, Données pour patients avec SRAS probable Voir Méthodes pour une description des essais utilisés dans ces analyses Triangle fermé, intubation; lignes pointillées, limite inférieure de la détection de la charge virale ARN copies / mL; barres hachurées, utilisation de la ribavirine; barres ouvertes, utilisation de stéroïdes; triangles ouverts et quadrilatères, périodes au cours desquelles les infiltrats pulmonaires maximaux ont été détectés par radiographie thoracique; Nous avons ensuite étudié la relation temporelle entre la charge virale de pointe, les taux de cytokines pro-inflammatoires, y compris IL-, IL- et TNF-α, et la progression de la lésion pulmonaire, contrairement aux niveaux IL- et IL-, le TNF- Le niveau α n’était pas détectable chez la plupart des patients et, par conséquent, n’a pas été analysé. L’élévation du taux d’IL- a généralement correspondu à celle du taux d’IL-, bien qu’une augmentation différée entre les jours et la maladie ait été observée chez les patients D, F et H en l’absence d’infection nosocomiale ou d’autres insultes identifiées. Dans l’ensemble, les niveaux maximaux IL- et / ou élevés d’IL- concordaient avec ou après la charge virale maximale et précédaient ou concordaient avec le chiffre maximal des infiltrats pulmonaires. Les taux d’IL associés au deuxième pic de charge virale n’ont pas été observés chez les patients G et H, probablement en raison de l’utilisation de stéroïdes le jour et le jour respectivement. La relation temporelle entre la charge virale maximale et l’IL-, ainsi que Ces résultats suggèrent que la réplication virale initiale entraîne l’activation de cytokines pro-inflammatoires qui, avec d’autres facteurs, contribuent à la progression de la maladie.

Figure Vue largeDownload slide Relation temporelle de la charge virale maximale, du niveau maximal d’IL-, des infiltrats pulmonaires maximaux, du nombre de lymphocytes nadir et du niveau maximal de LDH chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu sévère. Boîtes, intervalle interquartile; Relation temporelle de la charge virale de pointe, du niveau maximal d’IL-, des infiltrats pulmonaires maximaux, de la numération lymphocytaire nadir et du pic de LDH chez les patients atteints de syndrome respiratoire aigu sévère. Boîtes, intervalle interquartile; Il a été rapporté que la ribavirine ne peut pas inhiber la réplication du SRAS-CoV in vitro Auparavant, Peiris et al ont examiné le profil de charge virale chez les patients qui ont reçu la ribavirine et la thérapie aux stéroïdes. L’effet de la ribavirine sur la charge virale n’a pas été analysé. Dans cette étude, nous avons examiné l’effet de la ribavirine sur la charge virale in vivo. Malgré la petite taille de l’échantillon étudié, nous avons suivi de près la charge virale et l’utilisation de la ribavirine chez chaque patient. Nous rapportons différents profils de charge virale au cours de l’infection et que l’utilisation de la ribavirine n’entraîne pas de réduction de la charge virale chez ~% des patients étudiés. la mortalité élevée chez les patients atteints de SRAS nécessite une enquête plus approfondieCeci est la première étude qui étudie la relation temporelle de la charge virale, cytomégalovirus okines et progression clinique Bien qu’il y ait eu des variations dans les profils de cytokines, notre analyse a révélé une image commune et indiqué que l’élévation des taux d’IL- et / ou d’IL- après le pic de réplication virale est impliquée dans la progression pulmonaire. La numération des lymphocytes nadir et le pic de LDH ont été inférieurs à la charge virale maximale et au taux d’IL. Cela suggère qu’un processus à médiation immunitaire est impliqué dans la lymphopénie et les lésions tissulaires chez les patients atteints de SRAS . semble corréler avec la charge virale maximale P =, ce qui soulève la possibilité d’un effet direct de la réplication virale sur la lymphopénie Pris ensemble, nos résultats soutiennent l’hypothèse d’une phase de réplication virale suivie d’une phase de réponse immunitaire dans la pathogenèse du SRAS. Les résultats fournissent des informations importantes sur les stratégies thérapeutiques pour le SRAS, y compris les antiviraux et les régimes à base immunitaire, tels que les stéroïdes, les IgIV, En ce qui concerne les perfusions sériques en phase de convalescence, nous avons également examiné la séroconversion IgG chez ces patients par un test d’immunofluorescence indirecte décrit ailleurs Comme le montre la figure, la séroconversion était corrélée avec la diminution de la charge virale dans la plupart des cas. un retard dans la diminution de la charge virale a été constaté chez les patients E et F, et la charge virale est restée élevée chez les patients D et H en présence d’anticorps. Une étude a toutefois suggéré l’efficacité des perfusions de sérum en phase convalescente , notre observation suggère que le développement de l’anticorps pourrait ne pas être corrélé avec la clairance du virus, ce qui devrait être pris en considération avant d’utiliser les perfusions sériques en phase de convalescence comme stratégie thérapeutique

Remerciements

Nous remercions tout le personnel médical de l’hôpital universitaire national de Taïwan pour avoir soigné les patients atteints du syndrome respiratoire aigu sévère (SRAS) pendant l’épidémie à Taipei et tous les autres membres du groupe de recherche sur le SRAS du NTU College of Medicine / NTU Hospital. y compris Ding-Shinn Chen, Yuan-Teh Lee, Hong-Nerg Ho, Chu-Min Teng, Jin-Town Wang, Pei-Jer Chen, Li-Min Huang et Ming-Fu Chang, pour discussion et coordination; Tun-Hou Lee à la Harvard School of Public Health de Boston, pour commentaires critiques; et Applied Biosystems Taiwan, pour avoir fourni le détecteur de séquence prismatique ABI pendant la flambée. Soutien financier Conseil national de la science Bourse de Taiwan NSC – B – Conflit d ‘intérêts Tous les auteurs: No conflict