Diagnostic de la méningite entérovirale par l’utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase des échantillons de liquide céphalo-rachidien, de selles et de sérum

Comme les entérovirus peuvent être détectés dans divers échantillons cliniques pendant la méningite entérovirale, nous avons analysé l’utilité diagnostique combinée de la réaction en chaîne par polymérase PCR du liquide céphalo-rachidien CSF, fèces et sérum pour la détection d’entérovirus chez des adultes atteints de méningite aseptique ou d’encéphalite. ont été analysés chez des adultes pour lesquels une méningite entérovirale a été diagnostiquée sur la base de l’isolement viral et de la détection d’anticorps dans notre hôpital. Les résultats de la PCR ont également été analysés chez des adultes atteints de méningite ou d’encéphalite. periodResults Vingt-six pour cent des échantillons de liquide céphalorachidien et% d’échantillons de selles prélevés sur des patients atteints de méningite entérovirale ont eu des résultats de PCR positifs. Le rendement diagnostique du test était plus faible pour les échantillons de liquide céphalorachidien obtenus. Au lieu de cela, la PCR des fèces a été très utile plus tard, en raison des échantillons fécaux obtenus – jours après l’apparition clinique des résultats positifs. Aucun des échantillons de CSF et des échantillons fécaux obtenus des patients La PCR des échantillons fécaux obtenus tout au long de la méningite entérovirale présentait la sensibilité clinique la plus élevée pour la détection des entérovirus. Il est recommandé, en plus de la performance de la PCR du LCR, de prélever des échantillons fécaux chez les patients. avec soupçonné méningite entérovirale devrait être testé par PCR, en particulier lorsque la durée des symptômes est & gt; journées

Les entérovirus sont connus dans le monde entier comme une cause fréquente de méningite aseptique, avec des schémas épidémiques et endémiques, chez les patients de tout âge Bien que la méningite entérovirale soit généralement bénigne, les caractéristiques cliniques et les résultats du LCR associés à la maladie peuvent chevaucher ceux des Les infections herpétiques entraînent des séjours hospitaliers prolongés et le début du traitement présomptif jusqu’à ce que le diagnostic soit posé [, -] Un diagnostic définitif de méningite entérovirale peut être établi par détection directe du virus dans les échantillons de liquide céphalo-rachidien. voies respiratoires pendant la méningite entérovirale, suggérant que le virus est très probablement la cause de la maladie [,,,] Pendant la virémie, les entérovirus peuvent également être détectés dans le sang [,, -] méthodes PCR pour détecter les entérovirus De nombreuses études ont montré que la PCR du LCR est plus sensible et plus rapide que l’isolement du virus pour le diagnostic Comme la charge d’entérovirus a été décrite comme étant plus élevée dans les fèces que dans le LCR pendant la méningite entérovirale, les échantillons de selles sont également une bonne cible pour la détection de l’ARN entéroviral [,,] Bien que la supériorité de la PCR par rapport l’isolement du virus pour la détection d’entérovirus dans les échantillons fécaux a été rapporté [,,,], seule l’étude a décrit l’expérience clinique de ce test chez les patients atteints de méningite entérovirale De plus, nous ne connaissons aucune étude évaluant l’utilité du CSF. PCR et selles PCR en parallèle chez des patients atteints de méningite entéroviraleLe test PCR pour entérovirus a été adapté en clinique aux Départements de Neurologie et de Médecine de l’Hôpital Central de l’Université de Turku, Finlande en 2011. Le but de cette étude était d’évaluer la faisabilité de la PCR , selles et sérum dans le diagnostic étiologique de la méningite ou de l’encéphalite chez les patients adultes

Patients et méthodes

Le présent travail fait partie d’une étude de suivi prospectif plus large dans laquelle l’étiologie de la méningite ou de l’encéphalite aseptique a été évaluée chez des adultes consécutifs traités à l’hôpital central de l’Université de Turku pendant – Le diagnostic de méningite aseptique indicative de l’irritation méningée pour les patients atteints de la leucose psoriasique CSF, & gt; Le diagnostic d’encéphalite était basé sur des symptômes et des signes d’infection cérébrale aiguë soutenus soit par la détection de la pléocytose du LCR et / ou par des résultats neuroradiologiques et électroencéphalographiques compatibles avec un diagnostic d’encéphalite. Les tests les plus courants comprenaient la PCR du LCR pour les entérovirus de détection, le virus de l’herpès simplex HSV, le virus de la varicelle et du zona VZV et Borrelia. burgdorferi et selles et sérum PCR pour la détection des entérovirus Egalement, des échantillons de LCR, de selles et de prélèvements de gorge ont été cultivés pour la détection de virus Anticorps dirigés contre les entérovirus, les herpesvirus, les virus respiratoires adénovirus; virus grippaux A et B; le virus parainfluenza,, et; Le virus respiratoire syncytial, l’encéphalite à tiques, le Mycoplasma pneumoniae, le Chlamydia pneumoniae et le B burgdorferi ont été mesurés dans des échantillons sériques et CSF. Population étudiée Nous avons inclus dans cette étude des adultes consécutifs ayant reçu un diagnostic de méningite entérovirale sur la base de l’isolement viral et / ou détection d’anticorps pendant la période d’étude Nous avons également inclus des patients adultes consécutifs qui ont reçu un diagnostic de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause définie pendant la période d’étude et pour qui la PCR pour entérovirus était impliquée dans le diagnostic.Pour les patients atteints de méningite entérovirale, le diagnostic microbiologique était précis. , tel que déterminé par l’isolement des entérovirus du LCR ou par la détection EIA des anticorps IgM spécifiques de l’entérovirus dans le tableau du LCR Pour les patients, le diagnostic était probable, tel que déterminé par la détection EIA des anticorps IgM spécifiques des entérovirus dans le sérum et / ou par isolement des entérovirus d’échantillons de selles ou de prélèvements de gorge, sans autre r agent identifié pour la table de la maladie

Tableau View largeTéléchargement slideRT-PCR résultats pour les patients pour lesquels le diagnostic de méningite entérovirale a été considéré comme définitif ou probable sur la base de cultures virales pour les virus et / ou les anticorpsAnalyse des résultatsRT-PCR pour les patients pour lesquels le diagnostic d’entérovirus La méningite a été considérée comme définitive ou probable sur la base de cultures virales pour des analyses de virus et / ou d’anticorps. Les agents causatifs des méningites ou encéphalites d’une autre cause définie comprenaient le VHS récupéré chez les patients, VZV, TBE, Epstein-Barr virus, Le diagnostic microbiologique de l’infection par le VHS était fondé sur la détection d’acides nucléiques spécifiques du VHS dans le liquide céphalo-rachidien. Le diagnostic de l’infection par le VZV reposait sur la détection de virus spécifiques du VVZ. acides nucléiques dans le liquide céphalorachidien pour les patients ou sur des preuves sérologiques d’infection aiguë au VZV ou de détection de Les diagnostics microbiologiques de l’infection due aux autres agents étiologiques étaient basés sur la détection d’anticorps par EIA ou par immunoblot PCRR pour des échantillons d’entérovirus CSF ayant subi une RT-PCR pour la détection d’entérovirus chez des patients à l’admission. à l’hôpital Des échantillons fécaux et des échantillons de sérum ayant subi une RT-PCR ont été prélevés chez des patients en service neurologique ou médical durant la première semaine d’hospitalisation. La RT-PCR pour entérovirus a été réalisée au Département de Virologie de l’Université de Turku. Analyse des données Les résultats de la RT-PCR des échantillons de CSF, fécaux et sériques prélevés chez des patients atteints de méningite entérovirale et de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause ont été analysés pour déterminer la sensibilité, la spécificité et les valeurs prédictives de RT-PCR. du temps d’échantillonnage sur les résultats de la PCR a également été analysé

Résultats

Les patients atteints de méningite entérovirale LCR PCR pour entérovirus a été réalisée sur des échantillons prélevés chez des patients atteints de méningite entérovirale; Les résultats étaient positifs pour les échantillons de LCR à partir desquels un entérovirus a été isolé et pour les échantillons de LCR pour lesquels un entérovirus n’a pas été isolé. En outre, les échantillons de LCR positifs à la PCR n’ont pas été envoyés pour isolement du virus

Tableau View largeTélécharger slideAccuracy of CSF PCR pour la détection d’entérovirus dans le diagnostic étiologique de méningite ou d’encéphaliteTable View largeTélécharger la lameDiscrétion de PCR pour la détection d’entérovirus dans le diagnostic étiologique de méningite ou d’encéphaliteDeux échantillons de selles provenant de patients atteints de méningite entérovirale étaient PCR sensibilité positive,% tableau Comprend des échantillons de selles à partir desquels un entérovirus a été isolé, ainsi que des échantillons de selles qui n’ont pas été envoyés à la table d’isolement du virus selles PCR n’a pas été effectuée sur des échantillons dont un entérovirus a été isolé. pour enterovirus est également resté négatif culture

Tableau View largeTélécharger slideAccuracy of sool PCR pour la détection des entérovirus dans le diagnostic étiologique de méningite ou d’encéphaliteTable View largeTélécharger diapositiveAccuracy of sool PCR pour la détection des entérovirus dans le diagnostic étiologique de méningite ou encéphaliteCSF et des échantillons fécaux obtenus chez des patients atteints de méningite entérovirale ont été analysés par Les patients ayant eu un ARN entéroviral dans les fèces mais pas dans le LCR ont isolé un entérovirus dans le LCR du patient et des anticorps IgM spécifiques de l’entérovirus ont été détectés dans le LCR. Pour les patients, les résultats des deux tests PCR sont restés négatifs, bien que l’entérovirus ait été isolé du LCR. Tous les échantillons de sérum prélevés chez des patients atteints de méningite entérovirale étaient négatifs pour l’entérovirus. après l’apparition des symptômes, et PCR-n des échantillons CSF égaux ont été obtenus une médiane de plusieurs jours, – jours après l’apparition des symptômes, des échantillons fécaux positifs à la PCR ont été obtenus une médiane de plusieurs jours, – jours après le début des symptômes; ont été prélevés – jours après le début de l’infection L’échantillon fécal restant négatif pour l’entérovirus a été obtenu quelques jours après l’apparition des symptômes. L’influence du temps d’échantillonnage sur les résultats du PCR et des selles est illustrée dans la figure. ont été obtenus une médiane de la gamme de jours, – jours après le début des symptômes; ont été obtenus ⩽ jours après le début

Figure View largeDownload slideInfluence du temps d’échantillonnage sur les résultats de la PCR du LCR A et des selles PCR B pour la détection de l’entérovirus chez les patients atteints de méningite entérovirale Zone solide, nombre de résultats de PCR positifs; zone ouverte, nombre de résultats PCR négatifs Treize échantillons de LCR ont été obtenus – jours après l’apparition des symptômes et des échantillons ont été obtenus – jours après l’apparition Neuf échantillons fécaux ont été obtenus – quelques jours après l’apparition des symptômes et des échantillons ont été obtenus View largeTélécharger la diapositiveInfluence du temps d’échantillonnage sur les résultats du LCR PCR A et des selles PCR B pour la détection de l’entérovirus chez les patients atteints de méningite entérovirale Surface solide, nombre de résultats de PCR positifs; zone ouverte, nombre de résultats PCR négatifs Treize échantillons de LCR ont été obtenus – jours après l’apparition des symptômes et des échantillons ont été obtenus – jours après l’apparition Neuf échantillons fécaux ont été obtenus – jours après l’apparition des symptômes et des échantillons ont été obtenus Méningite ou encéphalite d’une autre cause définie Aucun des échantillons de liquide céphalorachidien recueillis chez des patients atteints de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause n’était PCR positif pour l’entérovirus, le tableau 2 des échantillons fécaux étaient positifs pour l’entérovirus. spécimens de selles Les échantillons de liquide céphalorachidien, sérum et écouvillon de la gorge n’ont pas montré de signes d’infection entérovirale aiguë chez les patients ayant reçu ces échantillons de selles. Chez les deux patients, le TBE a été diagnostiqué comme agent étiologique de la méningite. selles PCR pour l’entérovirus était% table Tous les échantillons de sérum prélevés chez des patients atteints de méningite o r l’encéphalite de cause non-entérovirale était PCR négative pour les échantillons d’entérovirus CSF qui ont subi une analyse par PCR ont été recueillies une médiane de plusieurs jours, – jours après l’apparition des symptômes; échantillons de selles, une médiane de la gamme de jours, – jours; Les résultats de la PCR du LCR étaient positifs uniquement pour les patients atteints de méningite à entérovirus, indiquant une valeur prédictive positive de%. Résultats de la PCR étaient positifs pour les échantillons fécaux obtenus à partir de Les patients atteints de méningite entérovirale et d’échantillons fécaux prélevés chez des patients présentant une infection non-entérovirale, indiquant une valeur prédictive positive de% PCR du tableau du LCR, étaient négatifs pour tous les patients atteints de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause définie et pour les méningites entérovirales. une valeur prédictive négative de% table selles PCR pour entérovirus était négative pour entérovirus pour des échantillons fécaux obtenus chez des patients atteints de maladie non-entérovirale et pour des échantillons fécaux prélevés chez des patients atteints de méningite entérovirale, indiquant une valeur prédictive négative de% table

Discussion

de la méningite entérovirale, corroborant les études antérieures [,,, -] Pourtant, une nouvelle découverte était que le rendement diagnostique par PCR était nettement inférieur pour le LCR obtenu & gt; jours après l’apparition clinique de la maladie, indiquant que l’utilité du LCR pour la détection de l’ARN entéroviral diminue quelques jours après l’apparition de la méningite. Le résultat le plus important est que le test de PCR fécale était cliniquement le plus sensible pour détecter l’entérovirus méningite, car la sensibilité de la PCR était de% pour les échantillons fécaux et% pour le LCR, et aucun des échantillons de sérum testés positifs par ce test. Nos résultats montrent que la sensibilité clinique de la PCR reste très élevée tout au long de la maladie; Glimåker et al ont rapporté que la PCR des selles est très utile pour diagnostiquer la sensibilité à la méningite entérovirale,%, mais l’influence du temps d’échantillonnage sur les résultats de la PCR n’a pas été évaluée dans cette étude. Ils n’ont pas comparé l’utilité des PCR selles et CSF, car les diagnostics de méningite entérovirale reposaient sur l’isolement viral ou sur l’analyse des anticorps, et les analyses PCR du LCR n’étaient pas effectuées. La réplication entérovirale dans le tractus gastro-intestinal pouvait persister plusieurs semaines après une infection clinique , même sans aucune maladie clinique Par conséquent, la détection de l’ARN entéroviral dans les échantillons fécaux ne confirme pas que l’entérovirus est l’agent causal de la méningite, bien que la découverte suggère que cette étiologie est hautement probable. ou un entérovirus a été isolé à partir d’échantillons de LCR obtenus à partir de% de patients qui avaient un ARN entéroviral dans les selles échantillons, confirmant le rôle étiologique de ce virus dans leur méningiteNon de nos patients atteints de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause définie avait l’ARN entéroviral dans le LCR, indiquant que la spécificité de la PCR du LCR était également%%; Les résultats étaient positifs uniquement pour les échantillons fécaux provenant de patients atteints de méningite ou d’encéphalite d’une autre cause définie. Chez les patients chez qui ces échantillons positifs à la PCR ont été obtenus, l’agent causal était TBE virus Chez un patient, l’entérovirus était également isolé des échantillons fécaux , confirmant l’existence de ce virus dans le tractus gastro-intestinal, vraisemblablement en tant que « spectateur innocent » Chez l’autre patient, les résultats de la culture des selles étant négatifs, le résultat positif de la PCR était le seul signe de l’existence d’entérovirus pendant la méningite; Dans notre étude, un résultat PCR positif au LCR a identifié de manière fiable la valeur prédictive positive de la méningite entérovirale, en%, mais une valeur positive de la méningite entérovirale a été déterminée rénal. résultat de test négatif n’a pas exclu de manière fiable cette possibilité valeur prédictive négative,%, surtout si l’échantillon CSF a été recueilli & gt; jours après l’apparition des symptômes cliniques D’autre part, un résultat négatif de selles PCR excluait pratiquement une étiologie entérovirale de la valeur prédictive négative de la méningite,%, même si l’échantillon de selles était obtenu plusieurs jours après l’apparition des symptômes cliniques. ont montré qu’un stade virémique se produit dans les infections entérovirales systémiques [,,] Dans notre étude, cependant, tous les échantillons de sérum obtenus chez des patients atteints de méningite entérovirale ont donné des résultats PCR négatifs. Cette découverte est cohérente avec les résultats d’une précédente étude. PCR sérique; Dans cette même étude, les résultats de la PCR sérique étaient positifs chez les enfants ayant des résultats positifs à la PCR du LCR, suggérant que la virémie détectable est plus fréquente chez les patients pédiatriques. , d’autres études ont rapporté un bon rendement diagnostique de la PCR pour les adultes atteints de méningite aseptique, même si des échantillons ont été prélevés ou des jours après l’apparition clinique Après l’apparition de la méningite Sur cette base, nos résultats négatifs ne peuvent être expliqués simplement par le retard du temps d’échantillonnage. Des études supplémentaires sont donc nécessaires pour évaluer l’utilité de la PCR pour les adultes atteints de méningite aseptique. En conclusion, la PCR était cliniquement la plus sensible. la détection de l’entérovirus au cours de la méningite entérovirale et pourrait donner un diagnostic présomptif tout au long de la maladie Un diagnostic définitif a été obtenu par PCR CSF, mais son utilité était nettement plus faible pour les échantillons obtenus & gt; jours après l’apparition clinique Par conséquent, il est recommandé que, en plus de la performance de la PCR du LCR, les échantillons fécaux obtenus chez les adultes suspectés de méningite entérovirale soient testés par PCR, en particulier lorsque la durée des symptômes est & gt; journées

Remerciements

Nous remercions Katja Rannikko pour la gestion de bases de données. Soutien financier Fondation de recherche d’Orion Corporation et Fondation neurologique finlandaise Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: aucun conflit