Caractéristiques cliniques et immunologiques des patients infectés par le virus de la grippe pandémique A HN après la vaccination

Contexte Nous avons suivi une cohorte de personnes ayant reçu un vaccin monovalent contre la grippe pandémique A HN Environ trois semaines après la vaccination, des personnes ont développé la maladie. Trois groupes de sujets ont été étudiés: patients ayant reçu ou non reçu un vaccin monovalent antérieur et un groupe témoin ont été immunisés avec le même vaccin. Pour tous les patients, les caractéristiques cliniques ont été caractérisées et les virus causaux ont été séquencés pour détecter d’éventuelles mutations. Ecouvillons nasopharyngés, échantillons sériques et cellules monocytaires du sang périphérique Les PBMC ont été collectées à des moments différents jusqu’à plusieurs semaines après l’apparition des symptômes. charge et réponses immunitaires humorales et cellulaires Des échantillons de sérum et des PBMC ont également été prélevés chez des sujets témoins vaccinés, respectivement Résultats Les deux groupes de patients avaient des manifestations cliniques similaires Aucune mutation virale substantielle n’a été détectée Comparé aux patients non vaccinés, charges virales chez les patients vaccinés Cependant, le virus est redevenu détectable. Deux semaines après l’infection, les patients vaccinés et non vaccinés avaient des taux d’anticorps neutralisants similaires à ceux des sujets témoins vaccinés. Par la suite, les niveaux d’anticorps neutralisants ont diminué de façon marquée. Pendant la phase aiguë, les taux de lymphocytes T mémoire et de facteur de nécrose tumorale-a étaient significativement plus élevés chez les patients vaccinés que chez les non-vaccinés. Conclusions Bien que les conséquences cliniques de l’infection soient comparables entre les patients vaccinés et non vaccinés, stimulé pendant quelques semaines, indiquant un avantage supplémentaire de la vaccination contre le virus de la grippe pandémique A HN

Les premières infections humaines causées par un nouveau virus grippal, désigné plus tard sous le nom de virus de la grippe pandémique AHN, ont été identifiées au Mexique et se sont rapidement propagées dans d’autres régions du monde Le premier cas importé a été signalé en Chine en mai. propagation à travers le pays à partir de Septembre En Février, & gt ;, des cas confirmés ont été signalés en Chine continentale, avec des décès En réponse à l’épidémie, la Chine a développé des vaccins efficaces et administrés aux groupes à haut risque. Septembre, nous avons initié une étude de suivi pour observer la cinétique des réponses immunitaires humorales et cellulaires dans une cohorte de recrues militaires en bonne santé Un total de volontaires des unités militaires de Beijing, Chine, ont accepté de participer à l’étude. avec un vaccin monovalent à dose unique Hualan Biological Bacterin Company contre le nouveau virus de la grippe A HN Des échantillons de sérum et des PBMC de cellules de monocytes sanguins périphériques ont été prélevés avant Mensuellement après la vaccination Après ~ semaines de suivi, les sujets ont rapporté avoir souffert d’une maladie pseudogrippale et ont ensuite été confirmés être infectés par le virus influenza A HN par réaction en chaîne de la polymérase en transcription inverse RT-PCR en temps réel. si ces patients ont été infectés par un virus mutant provoqué par la pression immunitaire due à la vaccination Nous nous sommes également intéressés à savoir si les manifestations cliniques et les réponses immunitaires peuvent différer de celles chez les patients qui n’avaient pas subi de vaccination

Méthodes

Conception de l’étude Douze patients vaccinés, non vaccinés et sujets témoins vaccinés ont été inclus dans l’étude Les patients vaccinés et sujets témoins provenaient de la cohorte de recrues militaires vaccinées mentionnées ci-dessus Les patients non vaccinés ont été sélectionnés parmi le personnel militaire confirmé pour une grippe pandémique A Les patients non vaccinés ont été appariés aux patients vaccinés selon l’âge et le sexe. Les deux groupes ont été recrutés au cours des premiers stades de l’infection, soit quelques jours après l’apparition des symptômes.Les informations sur les manifestations cliniques des deux groupes de patients ont été recueillies quotidiennement. apparition des symptômes pendant des semaines Des échantillons de sérum et de PBMC ont été prélevés à la semaine, et après le début des symptômes. Des échantillons de sérum et de PBMC ont été prélevés chez certains des patients vaccinés et non vaccinés quelques jours après l’apparition des symptômes. être infecté avec p Des échantillons de sérum étaient disponibles pour les sujets vaccinés et les sujets témoins vaccinés des semaines avant et après le mois de vaccination. Pour les sujets témoins vaccinés, des échantillons de sérum ont également été prélevés et des mois après la vaccination. La conception de l’étude a été approuvée par l’Institutional Review Board des Centres de contrôle et de prévention des maladies des forces armées chinoises, et tous les sujets d’étude ont donné leur consentement éclairé. Tests de laboratoire Des prélèvements nasopharyngés ont été examinés en temps réel. RT-PCR, tel que recommandé par l’Organisation mondiale de la santé Huit segments de virus isolés de patients ont été amplifiés et séquencés conformément aux procédures utilisées par Zhou et al Les charges virales ont été déterminées par RT-PCR quantitative sur la base de technique standard publiée par Lee et al , utilisant des amorces spécifiques Annexe, qui apparaît Les anticorps sériques contre le virus de la grippe pandémique AHN ont été testés par un essai de microneutralisation , pour lequel A / California / / HN et l’isolat d’un patient vacciné de cette souche IME- ont été utilisés. cytokines interféron [IFN] -γ, facteur de nécrose tumorale [TNF] -α, interleukine [IL] -, et IL- dans les échantillons de sérum ont été détectés simultanément en utilisant Procarta Kit de dosage cytokine Affymetrix Les échantillons ont été traités en utilisant Panomics, conformément à la La fréquence des lymphocytes T mémoire qui ont libéré l’IFN-sur la restimulation avec des pools peptidiques de différents sous-types de grippe A, c’est-à-dire pandémie de grippe A HN et saisonnière H Brisbane //, a été déterminée par un test ELISPOT immuno-enzymatique enzymatique, en utilisant un kit ELISPOT humain pré-imprégné d’INF-γ Dakewe BioTech, conformément aux instructions du fabricant http: // wwwdakewe c om / tech_column_detailsphp Le nombre de SFC de cellules formant des spots de chaque puits a été lu avec un lecteur ELISPOT automatisé CTL; La technologie cellulaire et soustraite par le nombre de cellules cultivées sans peptide pour déterminer la valeur finale pour chaque sujet Pour comparaison, nous avons mesuré les niveaux de cellules T mémoire pour les sujets témoins naïfs, qui étaient du même âge que les groupes d’étude. Les manifestations cliniques entre les patients vaccinés et non vaccinés ont été testées en utilisant le moyen géométrique des charges virales, les niveaux d’anticorps neutralisants, et les niveaux de cytokines ont été comparés entre différents groupes par t test des valeurs transformées en log Pour les valeurs négatives, une valeur de moitié limite a été utilisé P valeurs! ont été considérés comme statistiquement significatifs

Résultats

Pour les patients vaccinés, l’infection s’est produite – jours après l’intervalle médian de vaccination, jours L’âge des patients variait de à des années médiane, années, et% étaient des hommes Ceci est comparable aux caractéristiques de l’âge médian des patients non vaccinés, années]; sexe masculin,% et sujets témoins vaccinés âge médian, années [extrêmes, – années]; Les deux groupes de patients présentaient des manifestations cliniques similaires: fièvre, mal de gorge, mal de tête, malaise et diarrhée, à l’exception de la toux, moins fréquente chez les patients vaccinés que chez les patients non vaccinés. contre %; P = En outre, la durée de la fièvre était comparable entre les deux groupes en moyenne ± déviation standard, pour les patients vaccinés, ± jours; moyenne ± déviation standard pour les patients non vaccinés, ± jours Les séquences nucléotidiques de l’hémagglutinine HA, neuraminidase NA et M ont été obtenues pour tous les patients vaccinés. Selon les séquences d’acides aminés déduites, HA ProSer, SerPro, SerThr et IleVal ont été ont été détectés à NA ValThr et Asn Asp, comparés à la souche vaccinale A / California // HN Bien que les substitutions de HA aient résidé dans la région de liaison des récepteurs des anticorps neutralisants, les résultats des tests de microneutralisation étaient comparables lorsque nous utilisions le virus isolé IME. d’un patient vacciné ou de la souche vaccinale A / California // HN Il n’y a pas eu d’altération des séquences d’acides aminés M De plus, nous avons analysé les séquences entières de tous les segments d’isolats chez les patients vaccinés. la charge était initialement plus élevée chez tous les patients vaccinés dont les échantillons pouvaient être récupérés que chez les patients non vaccinés. Les charges virales ont diminué de façon constante chez les patients vaccinés au cours de la première semaine après le début du traitement, alors que les patients non vaccinés ont présenté un schéma plus irrégulier, avec des niveaux décroissants et certains restant stables ou même en augmentation. Cependant, chez ces patients vaccinés, le virus est redevenu détectable dans les jours suivants. Ce phénomène a également été observé chez les patients non vaccinés.

Figure View largeTélécharger la diapositive Charges individuelles de virus pendant les premières semaines après l’apparition des symptômes chez les patients bleus vaccinés, rouges et non vaccinés, infectés par le virus de la grippe pandémique A HN. La ligne noire pointillée, la limite de détection de l’assayFigure Voir grandDownload slideCharges individuelles de virus pendant les premières semaines après l’apparition des symptômes pour les patients bleus vaccinés rouges et non vaccinés avec une infection pandémique Influenza A HN Lignes grasses, moyennes géométriques pour les groupes de patients respectifs; ligne noire pointillée, la limite de détection du test montre que, avant vaccination, aucun anticorps neutralisant n’a pu être détecté dans les deux groupes vaccinés. Un mois après vaccination, le taux d’anticorps neutralisants était significativement plus faible chez les sujets vaccinés que chez les sujets témoins: vs :; P = Après infection par la pandémie grippale A HN, le taux d’anticorps neutralisants chez les patients vaccinés a rapidement augmenté au niveau des sujets témoins vaccinés en quelques semaines, mais il a diminué de façon marquée au cours de la semaine et a diminué jusqu’au même niveau En revanche, les taux d’anticorps neutralisants chez les patients non vaccinés étaient indétectables pendant la phase aiguë et augmentaient continuellement, bien qu’ils n’atteignaient jamais les niveaux maximaux des deux groupes vaccinés. La figure A montre un profil TNF-a stable pour les patients non vaccinés et les sujets témoins vaccinés. Les patients vaccinés ont présenté une élévation marquée peu de temps après l’infection, qui est restée légèrement élevée dans les semaines suivantes. L’expression de IL-, IL- et INF-g est restée au même niveau bas pendant toute la période d’observation pour les données de groupes non représentées. montre des valeurs élevées stables de cellules T mémoire dans les deux groupes vaccinés, par rapport à sujets témoins naïfs Les patients non vaccinés ont commencé à peu près au même niveau que les sujets témoins naïfs, mais seulement une semaine après l’infection, leurs valeurs de lymphocytes T mémoire ressemblaient à celles des groupes vaccinés

Discussion

Nous étions dans la situation unique d’identifier les patients infectés par le virus de la grippe pandémique A HN, même s’ils avaient été vaccinés un mois avant le début de l’infection. Notre analyse de séquence a démontré que le virus était essentiellement le même que la souche vaccinale. la région de liaison de l’anticorps neutralisant , les caractéristiques antigéniques n’ont pas été modifiées par rapport à la souche vaccinale Ceci indique qu’aucune mutation substantielle n’était responsable de l’infection chez les patients vaccinés De plus, les caractéristiques cliniques des patients vaccinés et non vaccinés étaient comparables. Pour être encore plus doux chez les personnes du premier groupe, qui étaient moins susceptibles de tousser. Dans l’ensemble, les patients vaccinés ont été infectés génétiquement par le même virus. Bien que le vaccin n’ait pas aidé à prévenir l’infection chez ces patients, le virus; À notre grande surprise, les charges virales initiales pour ces patients semblaient être sensiblement plus élevées que pour les patients non vaccinés. Cependant, leur charge virale a diminué plus rapidement pour atteindre des niveaux «négatifs», habituellement en ⩽ semaine. être conforme aux résultats d’une étude menée à Hong Kong montrant des charges virales initiales élevées et une clairance rapide dans un groupe de maladies bénignes, alors que les groupes de maladies graves ont commencé avec un niveau inférieur et une clairance retardée . considéré comme ayant un type similaire de maladie bénigne En outre, nous avons observé le phénomène intéressant que le virus est redevenu détectable après que les charges aient été « négatives ». A notre connaissance, ceci est le premier rapport sur la réapparition de tout virus grippal A chez les patients peu après l’autorisation initiale La raison possible pourrait être liée à des réponses immunitaires des patients, dont nous discuterons ci-dessousNotre im Les tests immunologiques ont montré que les patients vaccinés avaient une réponse immunitaire humorale beaucoup plus faible après la vaccination que les sujets témoins vaccinés. Ceci peut avoir été la cause de leur infection. Cependant, les tests ont également révélé que les patients vaccinés provoquaient rapidement des anticorps neutralisants et des réponses TNF-α Bien que les niveaux d’autres cytokines et de lymphocytes T mémoire n’aient pas été significativement augmentés par l’infection, un effet stimulant sur la réponse immunitaire humorale et cellulaire était évident, mais il a duré pendant un temps limité. – semaines à son niveau maximum Ce rappel a probablement causé une clairance virale rapide chez les patients vaccinés et probablement un effet modéré sur la sévérité de la maladie. Une réponse cytokinique robuste est généralement associée aux virus grippaux hautement pathogènes, tels que grippe pandémique A HN et virus aviaire HN. ,] Des études récentes ont indiqué que le virus de la grippe pandémique A HN induit réponse immune à médiation cytokine innée relativement faible comme le font les virus de la grippe saisonnière A HN, caractérisés par une mauvaise expression des gènes de cytokines antivirales et pro-inflammatoires dans les DC et les macrophages TNF-α a également démontré une forte activité antivirale contre et l’effet antiviral du TNF-α était généralement plus fort que celui de l’IFN- Cette différence dans les réponses à médiation par les cytokines reste un sujet d’investigation future. Nous concluons que, bien que les conséquences cliniques de l’infection soient comparables entre elles. patients vaccinés et non vaccinés, les réponses immunitaires humorales et cellulaires chez les patients vaccinés sont amplifiées pendant quelques semaines, indiquant un avantage supplémentaire de la vaccination contre le virus de la grippe pandémique A HN

Remerciements

Nous remercions le Dr MD de Jong du Centre Médical Erasmus du Centre Médical Universitaire de Rotterdam aux Pays-Bas pour sa lecture critique de l’article cancer du col de l’utérus. Le Fonds National des Sciences pour les Jeunes Diplômés, les Sciences Naturelles pour les Grands Projets Internationaux de Recherche, le Programme National de Soutien Scientifique et Technique BADA, et la Chine Subvention spéciale pour la prévention et le contrôle des maladies infectieuses ZX-Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits